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          酶標儀基本知識及其檢測原理

          時(shí)間:2024-06-13 點(diǎn)擊:216次

          酶標儀基本知識及其檢測原理

           

           

          HBS-4009+HBS-4011.jpg


          酶標儀有單波長(cháng)和雙波長(cháng)檢測功能有時(shí)使用者不知在什么情況下使用單或雙波長(cháng)檢測。所謂的“單波長(cháng)"就是使用一種對顯色具最大吸收的波長(cháng)即450 nm492 nm進(jìn)行比色測定;而“雙波長(cháng)"則除了用對顯色具最大吸收的波長(cháng)即450 nm492 nm進(jìn)行比色測定外,同時(shí)用對特異顯色不敏感的波長(cháng)如630 nm進(jìn)行測定,酶標儀最后打印出來(lái)的吸光度則為二者之差。630 nm波長(cháng)下得到的吸光度是非特異的,來(lái)自于板子上諸如指紋、灰塵、臟物等所致的吸收。因此,在ELISA比色測定中,最好使用雙波長(cháng),且不必設空白孔。

           

          二、測定的吸光度范圍   

           

          通常,酶標儀的吸光度測定范圍在。0-2.5之間即可以滿(mǎn)足ELISA的測定要求。早期的酶標儀可測定的吸光度一般在0-2.5之間,但現在基本上都做了拓寬,可達到3.5以上,并且能保持很好的精密度與線(xiàn)性。如Labsystems公司Dragon Wellscan MK-2的吸光度測定范圍為0-3.5,而Multiskan Ascent的吸光度測定范圍(Abs)達0-4.0,在0-4.0范圍,線(xiàn)性誤差不超過(guò)±2.0%,在0.3-3.0吸光度范圍內,測定精密度CV小于±0.2%;3.0-4.0 Abs范圍內,測定精密度CV小于士0.2%。因此,對于酶標儀的吸光度范圍不必去刻意追求大的吸光度范圍,主要要看在一定的吸光度范圍內的線(xiàn)性和精密度如何。

           

          三、光學(xué)系統   

           

          酶標儀的光學(xué)系統采用的是垂直光路多通道(通常為812通道,亦有單通道)檢測,一般為硅光管或光導纖維,除測定通道外,有的酶標儀還有一個(gè)參比通道,每次測定可進(jìn)行自我校準。酶標儀的光學(xué)系統功能如何,均可通過(guò)酶標儀測定的吸光度范圍、線(xiàn)性度、精密度和準確度等體現出來(lái)。光學(xué)系統好的話(huà),則上述指標也應較佳。測定的精密度與測定通道之間的均一性有直接關(guān)系。單通道可避免因通道不同所致的差異。

           

          四、檢測速度   

           

          酶標儀的檢測速度是指其完成比色測定所需要的時(shí)間。檢測速度快,有利于提高檢測的精密度,即避免由于測定過(guò)程中,因測定時(shí)間不同所致的各微孔間吸光度間的差異。目前市場(chǎng)上常見(jiàn)的酶標儀檢測速度都非???,通常在數秒鐘內,如Labsystems公司Dragon Wellscan MK-2MK-3檢測96孔只需2s(連續模式)或5s(步進(jìn)模式)。Multiskan Ascent為單通道檢測,亦只需9s(連續模式)或14s(步進(jìn)模式)。又如BioRad公司的Benchmark的檢測速度單波長(cháng)為7s,雙波長(cháng)為15s。

           

          五、震板功能   

           

          酶標儀的震板功能是指酶標儀在對ELISA板孔進(jìn)行比色測定前對其進(jìn)行振蕩混勻,使板孔內顏色均一。目前市場(chǎng)上常見(jiàn)的酶標儀均有震板功能,所不同的是震板方式,有的可按上下、左右或旋轉等方式及振蕩幅度等任意調節,如LabsystemsMK-2;有的則較為固定,如BioRad 550。使用有震板功能的酶標儀,在進(jìn)行ELISA測定顯色反應完成加入終止劑后,可不必振蕩混勻,直接放人酶標儀上測定即可。

           

          六、溫育功能   

           

          溫育功能是指酶標儀本身能按要求自動(dòng)精確地控制儀器內部的溫度,使得ELISA測定中微孔板條的溫育過(guò)程可在儀器內部完成,而無(wú)需再外配溫箱。目前,只有少部分酶標儀具有此種功能,如Labsystems公司的Multiskan Ascent,BioRad公司的BenchmarkBiotek公司的ElxS08等。溫育功能只是酶標儀的一個(gè)附加功能,是否具有并不能說(shuō)明酶標儀檔次的高低及儀器的優(yōu)劣。作為實(shí)驗室是否選擇,則可根據自己實(shí)驗室的條件及需要來(lái)決定。

           

           

           


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